QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)用戶指南

摘要：本文為科研人員提供QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)的詳細(xì)用戶指南。介紹了該產(chǎn)品的基本信息、原理、應(yīng)用場景、操作步驟、注意事項及性能參數(shù)，旨在幫助用戶更好地理解和使用該產(chǎn)品，以提升實(shí)驗(yàn)效率與準(zhǔn)確性。
關(guān)鍵詞：QIAGEN 19133蛋白酶K；DNA和RNA制備；蛋白酶消化；用戶指南

一、引言

在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，DNA和RNA的制備是至關(guān)重要的步驟。蛋白酶K作為一種高效的蛋白酶，在DNA和RNA制備過程中的蛋白酶消化步驟中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)憑借其高活性、廣泛的底物特異性和穩(wěn)定的性能，本文將詳細(xì)介紹該產(chǎn)品的相關(guān)信息，以幫助用戶更好地使用。

二、產(chǎn)品概述

（一）基本信息

• 品牌：QIAGEN

• 產(chǎn)品名稱：蛋白酶K（Proteinase K）

• 貨號：19133

• 規(guī)格：10ml

• 存儲條件：2—8℃

（二）產(chǎn)品原理

QIAGEN蛋白酶K是一種從腐生真菌Tritirachium album中分離出來的枯草桿菌蛋白酶型蛋白酶。它具有很高的比活性，能在很寬的溫度（通常在37—70℃范圍內(nèi)活性較高）和pH值（pH 4.0—12.0，最佳pH為7.5—9.0）范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，且在較高溫度下活性大大提高。可溶性鈣對于其酶活性不是必需的，這意味著用于抑制Mg2?依賴性酶（如核酸酶）的EDTA不會抑制蛋白酶K的活性。

三、產(chǎn)品特點(diǎn)

（一）高活性

在多種DNA和RNA純化流程常用的緩沖液中提供高活性，如30 mM Tris·Cl、30 mM EDTA、5% Tween 20、0.5% Triton X-100、800 mM GuHCl等緩沖液中，都能保持較高的活性。

（二）廣泛的底物特異性

適用于多種樣本的蛋白酶消化，包括血液、細(xì)胞培養(yǎng)基、組織、細(xì)菌等，能夠高效地消化樣本中的蛋白質(zhì)，為后續(xù)的DNA和RNA提取創(chuàng)造有利條件。

（三）穩(wěn)定性好

在很寬的溫度和pH值范圍內(nèi)可保持穩(wěn)定，并且在高溫時具有更高活性，這使得它能夠適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)條件和樣本類型。

（四）不含DNase和RNase活性

避免了在消化過程中對DNA和RNA的降解，保證了后續(xù)提取的核酸的質(zhì)量。

四、應(yīng)用場景

（一）DNA提取

在從血液、細(xì)胞培養(yǎng)基和組織中純化DNA的過程中，蛋白酶K能夠有效地消化樣本中的蛋白質(zhì)，使DNA得以釋放和純化。例如，在QIAGEN Genomic-tip操作流程中使用的Buffer G2（30 mM Tris·Cl；30 mM EDTA；5% Tween 20；0.5% Triton X-100；800 mM GuHCl）中，蛋白酶K表現(xiàn)出較高的活性，有助于從復(fù)雜樣本中高效提取DNA。

（二）RNA提取

在RNA提取過程中，蛋白酶K同樣能夠消化蛋白質(zhì)，減少RNA的降解，提高RNA的純度和產(chǎn)量。

（三）其他應(yīng)用

除了DNA和RNA提取，蛋白酶K還可用于其他需要蛋白酶消化的實(shí)驗(yàn)，如蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的樣品處理等。

五、操作步驟

（一）配制蛋白酶K溶液

一般配制濃度為20mg/ml蛋白酶K溶液。例如，可將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml dd水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K溶解。不要渦旋混合，再加水定容到10ml，最后分裝成小份貯存于-20℃。

（三）使用方法

1. 根據(jù)終濃度50—100μg/ml，吸取適量蛋白酶K溶液，滴到消化樣品中。

2. 孵育：孵育溫度為55—65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15min至48h，依據(jù)樣本情況而定。

3. 后續(xù)處理：孵育完成后，按照相應(yīng)的DNA或RNA提取試劑盒的操作步驟進(jìn)行后續(xù)處理。

六、注意事項

（一）操作防護(hù)

本產(chǎn)品對人體有害，操作時請務(wù)必穿實(shí)驗(yàn)服，戴一次性手套和口罩，避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

（二）稀釋建議

如果需把20mg/ml的蛋白酶K再稀釋，建議使用pH7.4—7.8的10mM Tris-HCl進(jìn)行稀釋。

（三）避免同時使用

使用手動QIAamp DNA Blood Kit和QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit的用戶應(yīng)該用7ml蒸餾水重懸每個瓶中的QIAGEN Protease。使用QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit的用戶應(yīng)該用10ml蒸餾水重懸每個瓶中的QIAGEN Protease。QIAGEN蛋白酶不可與DNeasy Tissue、DNeasy 96 Tissue及QIAamp DNA Mini Kit中的ATL緩沖液同時使用。

（四）特殊條件下的注意事項

在SDS濃度大于0.5%、肌氨酰濃度大于1%、或有高濃度的其他去污劑時，EDTA的濃度必須小于8mM，這樣才能在延長的孵育時間內(nèi)達(dá)到安全活性。

（五）儲存條件

啟用后如需反復(fù)使用，應(yīng)置于-20℃—-80℃冰箱冷凍保存，或配制成溶液后過濾除菌并分裝保存。

七、性能參數(shù)

（一）活性

600mAU/ml（在規(guī)定條件下，每分鐘釋放1μmol酪氨酸所需酶量為1個活性單位）。

（二）純度

Native PAGE電泳檢測純度≥95%。

（三）比活性

比活性值≥30U/mg蛋白。

（四）穩(wěn)定性

在尿素和SDS中活性穩(wěn)定，在pH4.0—12.0范圍內(nèi)均有活性，最佳pH為7.5—9.0。

八、結(jié)論

QIAGEN 19133蛋白酶K(10ml)是一種高效、穩(wěn)定的蛋白酶，適用于DNA和RNA制備過程中的蛋白酶消化。通過遵循本用戶指南中的操作步驟和注意事項，科研人員可以更好地利用該產(chǎn)品，提高實(shí)驗(yàn)效率和準(zhǔn)確性。